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穩轉沉默細胞系構建
慢病毒(Lentivirus)是逆轉錄病毒的一種。慢病毒載體是以HIV-1(人類免疫缺陷I型病毒)為基礎發展起來的基因治療載體??捎糜诟腥疽揽總鹘y轉染試劑難于轉染的細胞系如神經細胞、肝細胞、心肌細胞、內皮細胞、干細胞、原代細胞以及懸浮細胞和處于非分裂狀態的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組,進行長時間的穩定表達。
載體示意圖
注:5′LTR、3′LTR 、RRE均為慢病毒的元件;U6、CMV為啟動子;2A為自剪切多肽,蛋白的高效表達,表達后自動剪切。EGFP為增強綠色熒光蛋白;Mcherry為紅色熒光蛋白;Puro為嘌呤霉素;Nanoluc-EGFP為熒光素酶和綠色熒光蛋白融合蛋白。
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