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轉基因?。ù螅┦?/h1>
技術原理簡介
轉基因小鼠是指將一段外源基因隨機整合到小鼠基因組中,獲得過表達該目的基因的小鼠模型?;捎肞iggyBac轉座子系統實現表達目的基因轉基因鼠的構建,PiggyBac轉座子是一種通過“剪切&粘貼”式機制在載體和基因組間進行高效移動遺傳元件的系統。在轉座時,轉座酶可以特異性的識別位于轉座子載體兩端的反向末端重復序列(ITR),并有效的將ITR將其之間的序列從轉座載體上原有的位置剪切下來,然后高效的整合進染色體上的TTAA位點。
基石生命采用的PiggyBac介導法進行轉基因鼠的構建,采用受精卵注射的方式將構建有目的片段的轉座子載體與PiggyBac轉座酶的mRNA一起注射到受精卵中,使目的片段高效的整合到基因組上,PiggyBac系統較普通方法具有更高的基因組整合效率,攜帶的目的基因不受大小限制,并且具有更高的表達效率。本公司鄭重承諾,失敗全額退款!
PiggyBac構建轉基因小(大)鼠技術流程圖
服務流程及周期
步驟 | 內容 | 周期 |
轉基因元件獲得 |
客戶提供或全基因合成 |
根據實際情況而定 |
轉基因質粒構建 |
將轉基因元件構建到轉基因質粒pPiggy載體上 |
2-4周 |
構建轉基因小鼠Founder |
顯微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宮,3周后出生,2周齡基因型鑒定。數量:至少2只 |
3-5個月 |
轉基因小(大)鼠類型
過表達轉基因小(大)鼠
構建上述常規的帶有啟動子和目的基因的表達載體,利用原核顯微注射的方法將表達載體注射到小鼠受精卵中。通過構建廣泛性/組織特異性/誘導性等不同的啟動子,實現轉基因在小鼠組織廣泛性/特異性等的表達,達到對目的基因功能的研究目的。
RNAi轉基因小(大)鼠
通常采用U6/H1等III型啟動子驅動shRNA表達,設計靶序列構建shRNA載體,利用原核顯微注射的方法將shRNA載體注射到受精卵中。在基因表達的過程中,通過shRNAi的干擾作用,達到對目的基因表達的抑制,實現基因功能的研究。
隨機插入式條件性過表達小(大)鼠
將構建的廣泛表達啟動子-LoxP-Stop-LoxP-轉基因載體通過顯微注射制備組織特異性轉基因小(大)鼠模型,轉基因在正常情況下并不表達,只有與相應的組織特異性表達Cre/CreERT2小鼠雜交后,因Stop終止序列在特定的組織中被去除,從而達到轉基因在誘導性/特定組織中特異性表達的目的。
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