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點突變小(大)鼠
在目的基因上引入點突變,對于疾病模型的建立具有重大的意義,如候選點突變是基因疾病相關的人類基因SNP,對目標基因的候選位點進行點突變,若動物模型上再現了該疾病的性狀,則建立的小鼠模型可以為精準治療提供模擬人類疾病的動物模型。
技術原理簡介
基因點突變(Point Mutation)是指通過TALEN/CRISPR技術在靶基因的目的位置引進特定的突變。通過針對靶基因的待突變位點設計相應的打靶質粒,并且根據需要點突變的位置構建含點突變的Donor質粒,將Donor質粒與打靶質粒共同顯微注射進小鼠的受精卵中,TALEN/CRISPR定位到基因組上的靶序列并切割雙鏈DNA,在隨后的修復過程中,細胞以含同源序列的Donor質粒為模版修復基因組DNA,最終獲得在目的DNA序列引進點突變的小鼠。
TALEN/CRISPR構建定點敲入小(大)鼠技術流程圖
服務流程及周期
服務流程及周期圖
步驟 | 內容 | 周期 |
敲入元件獲得 | 客戶提供或全基因合成 | 根據實際情況而定 |
Cas9/gRNA的合成和同源模板(Donor)構建 | 合成Cas9/gRNA,檢測Cas9/gRNA活性,構建同源模板質粒 | 2個月 |
得到Founder | Cas9/gRNA體外轉錄成mRNA和Donor質粒共同顯微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宮,3周后出生,2周齡基因型鑒定。 | 2-3個月 |
得到F1代雜合子 | 2個月后性成熟,Founder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周齡基因型鑒定,獲得穩定傳代的基因突變雜合子F1代。 | 3-4個月 |
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