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條件性過表達小(大)鼠
技術原理簡介
條件性過表達小(大)鼠的構建主要是通過Cre/LoxP重組系統來實現的。該系統是位點特異性重組酶系統，已發展成為在體內、外進行遺傳操作的有力工具。其可以使靶基因的表達或缺失發生在試驗動物發育的某一階段或某一特定的組織器官。此外，若與控制Cre表達的其他誘導系統相結合，還可以對某一基因同時實現時空兩方面的調控。通過構建帶有廣泛表達啟動子-LoxP-Stop-LoxP-目的基因的條件性調控表達框架，通過顯微注射制備在特定位點，如Rosa26, H11等位點，帶有條件性調控表達框架的敲入小(大)鼠模型，轉基因在正常情況下并不表達，只有與相應的組織特異性表達的Cre/CreERT2小鼠雜交后，因Stop終止序列在特定的組織中被去除，從而達到轉基因在誘導性/特定組織中特異性表達的目的。
Rosa26或H11位點的優勢
表達Pattern穩定: 定點敲入構建過表達，不像隨機插入基因組的轉基因，表達特異性和表達量（expression pattern）穩定
表達Pattern不受上下游DNA元件影響： Rosa26 or Hipp11(H11)無影響基因特異表達的調控元件，不會影響敲入的啟動子的表達Pattern
TALEN/CRISPR構建條件性敲除小(大)鼠技術流程圖
服務流程及周期
服務流程及周期圖
| 步驟 | 內容 | 周期 |
| 轉基因元件獲得 | 客戶提供或全基因合成 | 根據實際情況而定 |
| Cas9/gRNA的合成和同源模板(Donor)構建 | 合成Cas9/gRNA，檢測Cas9/gRNA活性，構建同源模板質粒 | 2個月 |
| 得到Founder | Cas9/gRNA體外轉錄成mRNA和Donor質粒共同顯微注射受精卵，胚胎移植到代孕母鼠子宮，3周后出生，2周齡基因型鑒定。 | 2-3個月 |
| 得到F1代雜合子 | 2個月后性成熟，Founder和野生型小鼠交配，3周后出生，2周齡基因型鑒定，獲得穩定傳代的基因突變雜合子F1代。 | 3-4個月 |
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