全國服務熱線:010-62673291
400-888-8690
基因敲除?。ù螅┦?/h1>
唯尚立德擁有成熟高效的TALEN及CRISPR/Cas9基因敲除技術平臺、完善的模式生物構建平臺,完美整合從載體設計、構建、活性鑒定、基因突變動物模型建立等各個環節?,F推出小鼠、大鼠等模式生物基因敲除技術服務,為客戶提供周期短、性價比高的模式生物構建服務。至今未曾失敗過,我們鄭重承諾失敗將全額退款。
TALEN靶向敲除基因原理簡介
TALE技術(Transcription activator-like effectors)是一種嶄新的分子生物學工具??茖W家發現,來自植物細菌Xanthomonassp的TAL蛋白的核酸結合域的氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有恒定的對應關系。利用TAL的序列模塊,可組裝成特異結合任意DNA序列的模塊化蛋白。TALEN(Transcription activator-like effector(TAL) nucleases)技術是基于TALE與人工改造的核酸內切酶的切割域(FokI)構建針對任意特定核酸靶序列的重組核酸酶。通過TAL的DNA識別域結合到靶位點上,及FokI切割域形成二聚體后,可特異性對目標DNA序列實現切斷。在隨后的非同源末端連接修復過程中,斷開的DNA雙鏈會由于堿基的隨機增減從而以一定的概率實現目標基因功能的缺失。
CRISPR/Cas9靶向敲除基因原理簡介
CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一種由RNA指導Cas核酸酶對特定基因序列進行DNA修飾的技術。CRISPR/CRISPR-associated(Cas)是細菌和古細菌一種不斷進化適應的免疫防御機制。在這系統中,CRISPR對特定DNA的識別是由crRNA或向導RNA通過堿基互補配對,定向尋找目標DNA序列。靶定目標序列后,Cas9蛋白負責對目標DNA進行剪切,造成靶DNA雙鏈斷裂。在隨后的非同源末端連接修復過程中,斷開的DNA雙鏈會由于堿基的隨機增減從而以一定的概率實現目標基因功能的缺失。
TALEN/CRISPR構建基因敲除小(大)鼠技術流程圖
服務流程及周期
步驟 | 內容 | 周期 |
打靶質粒構建 | 設計不同靶點,SNP檢測,組裝TALEN質粒2-3對,或3條gRNA,檢測TALEN的SSA活性或gRNA活性 | 1個月 |
得到Founder | 選擇活性較高的打靶質粒,體外轉錄成mRNA,顯微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宮,3周后出生,2周齡基因型鑒定。數量:至少2只 | 2-3個月 |
得到F1代雜合子 | 2個月后性成熟,Founder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周齡基因型鑒定,獲得穩定傳代的基因突變雜合子F1代。數量:2個lines、至少2只/line(性別隨機,若甲方要求一雌一雄,如果第一批F1代小鼠都是同性別,則進行第二次交配,每次交配到生出需3個月,依此類推,直至一雌一雄。) | 3-4個月 |
我們的優勢
1、我們已經具有4000多對TALEN質粒、CRISPR/Cas9系統構建和活性驗證的成功經驗,大量的技術經驗使我們能準確、快速地構建出具有體內活性的TALEN和CRISPR/Cas9質粒。
2、我們具有強大的售前和售后技術支持團隊,可以為客戶提供免費專業的技術支持和方案設計及拓展。
3、我們已經成功使用TALEN及CRISPR/Cas9系統為客戶提供了上百例成功案例,囊括家蠶、斑馬魚、小鼠、大鼠等突變體,至今未曾失敗過,我們的服務受到了客戶的一致認可。
4、價格低、周期短。我們高效專業的技術平臺使得我們能在最短的時間內完成模式生物的構建服務。較短的時間使得我們能夠大大的節約成本,為客戶提供價格最低的服務
基石生命公眾號
基石醫學公眾號
地址:北京市海淀區杏石口路65號益園文化創意產業基地C區11號樓西段2層 全國服務熱線:010-62673291 400-888-8690
Email:order@gx-health.com(訂購) support@gx-health.com(咨詢)